Pour l'utilisateur au quotidien.
Un microscope en mode fluorescence sans filtre d'émission correctement positionné peut émettre des UV directs dans l'oeil et provoquer des lésions irréversibles. Vérifier que les filtres sont en place avant de regarder dans les oculaires. En cas de doute, contacter le responsable du laboratoire avant d'utiliser le mode fluorescence.
Faire descendre un objectif trop vite sur une lame peut casser la lamelle couvre-objet et rayer ou éclater la lentille frontale de l'objectif. Utiliser la molette de mise au point grossière très lentement quand on descend vers la préparation. En cas de lamelle brisée, nettoyer immédiatement et inspecter l'objectif avant toute nouvelle utilisation.
Laisser la lampe allumée réduit sa durée de vie et peut faire monter la température à l'intérieur du microscope. Éteindre la source lumineuse dès la fin de l'observation. Replacer la housse de protection pour éviter la poussière sur les optiques.
Pour l'exploitant de l'équipement.
Un microscope en mode fluorescence sans filtre d'émission correctement positionné peut émettre des UV directs dans l'oeil et provoquer des lésions irréversibles. Vérifier que les filtres sont en place avant de regarder dans les oculaires. En cas de doute, contacter le responsable du laboratoire avant d'utiliser le mode fluorescence.
Les objectifs et les oculaires d'un microscope optique comportent des lentilles traitées anti-reflet et des colles optiques très sensibles aux solvants. Utiliser exclusivement de l'isopropanol à 70 % (ou un nettoyant optique du fabricant) sur un coton-tige ou une lingette optique sans charpie. Ne jamais utiliser d'acétone, d'alcool dénaturé ou un chiffon ordinaire. Le mouvement de nettoyage se fait du centre vers la périphérie en rotation, jamais en aller-retour. Un objectif rayé ne peut pas être réparé - le coût de remplacement d'un objectif 100x HF est généralement supérieur à 500 euros.
La mise au point doit toujours débuter avec l'objectif de plus faible grossissement (en général 4x ou 10x). Monter en grossissement progressivement après centrage de la zone d'intérêt. Passer directement à l'objectif 40x ou 100x sur une lame non mise au point peut amener l'objectif en contact avec la lamelle et entraîner une casse de l'objectif (objectif à immersion : risque supplémentaire d'entrée d'air dans la goutte d'huile). Régler la hauteur du condenseur et l'ouverture du diaphragme à chaque changement d'objectif.
Les microscopes équipés d'une lampe UV (épifluorescence, DAPI, FITC) émettent des rayonnements UV pouvant provoquer des lésions oculaires irréversibles. Ne jamais regarder directement la source UV ou un échantillon en fluorescence sans que les filtres d'excitation et d'émission soient correctement en place. Vérifier l'état du filtre barrière (emission filter) annuellement. Une fissure dans un filtre optique laisse passer des longueurs d'onde non filtrées. Porter des lunettes UV adaptées lors de toute manipulation autour du microscope en mode fluorescence.
Faire descendre un objectif trop vite sur une lame peut casser la lamelle couvre-objet et rayer ou éclater la lentille frontale de l'objectif. Utiliser la molette de mise au point grossière très lentement quand on descend vers la préparation. En cas de lamelle brisée, nettoyer immédiatement et inspecter l'objectif avant toute nouvelle utilisation.
Laisser la lampe allumée réduit sa durée de vie et peut faire monter la température à l'intérieur du microscope. Éteindre la source lumineuse dès la fin de l'observation. Replacer la housse de protection pour éviter la poussière sur les optiques.
Pour le technicien qui intervient.
Les objectifs et les oculaires d'un microscope optique comportent des lentilles traitées anti-reflet et des colles optiques très sensibles aux solvants. Utiliser exclusivement de l'isopropanol à 70 % (ou un nettoyant optique du fabricant) sur un coton-tige ou une lingette optique sans charpie. Ne jamais utiliser d'acétone, d'alcool dénaturé ou un chiffon ordinaire. Le mouvement de nettoyage se fait du centre vers la périphérie en rotation, jamais en aller-retour. Un objectif rayé ne peut pas être réparé - le coût de remplacement d'un objectif 100x HF est généralement supérieur à 500 euros.
La poussière est le premier ennemi des optiques d'un microscope. Recouvrir le microscope de sa housse après chaque utilisation, même courte. Dans les environnements humides (plus de 60 % d'humidité relative), les lentilles peuvent développer des moisissures (fungus) qui créent des dépôts permanents impossibles à nettoyer sans démonter l'objectif. Stocker le microscope dans une armoire sèche ou avec un déshydratant (gel silica). Les objectifs montrant des taches concentriques circulaires sont probablement atteints de fungus.
L'éclairage de Köhler garantit une illumination uniforme du champ et un contraste optimal. Il doit être recentré lorsque le microscope a été déplacé, après remplacement d'une ampoule ou si des zones sombres apparaissent dans le champ. Le centrage des objectifs se règle avec les vis de centrage du condenseur. Faire réaliser ce réglage par un technicien qualifié après chaque déplacement significatif ou annuellement. Un mauvais éclairage augmente la fatigue oculaire des opérateurs et dégrade la qualité des images.
Pour le responsable / gestionnaire.
Les microscopes équipés d'une caméra numérique nécessitent une calibration annuelle de l'échelle de mesure (nombre de pixels par micromètre) pour chaque combinaison objectif/caméra. Un logiciel de mesure non calibré peut générer des erreurs de mesure de 5 à 15 % selon le grossissement. Utiliser une lame micrométrique certifiée (précision à 1 micromètre) pour établir et vérifier la calibration. En contexte qualité ou médical, la calibration doit être documentée et tracée. La calibration prend moins de 30 minutes et évite des erreurs d'interprétation potentiellement coûteuses.